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湖南国伦美生物现供应异硫氰酸胍CAS 593-84-0,欢迎订购!

                                                                                            异硫氰酸胍

G5631Guanidine   thiocyanate

CAS:593-84-0
G5631异硫氰酸胍,99%(生物技术级)


G5631别名:硫氰酸胍


说明:白色粉末。   C2H6N4S  MW:118.16  Store:RT

异硫氰酸胍的用途

异硫氰酸胍法同时提取血清、双拭子中动物DNA病毒和RNA病毒核酸。用于变性裂解细胞;提取RNA和DNA,无RNA酶和DNA酶活性,强蛋白变性剂,异硫氰酸胍法提取同时提取DNA病毒和RNA病毒核酸。

产品介绍:

CAS号:593-84-0,

分子式:C2H6N4S

分子量:118.161,

产品性状:白色结晶粉末

熔点115-120℃

现在动物病毒核酸提取方法主要有经典Trizol提取法和以Trizol作为裂解液的硅胶模柱式提取法两种方法。经典Trizol提取法过程繁琐、周期长、提取效率低、技术要求高,以Trizol作为裂解液的硅胶模柱式提取法成本较高、提取RNA的质量不高、且只能提取RNA病毒。

一种同时提取血清、双拭子中动物DNA病毒和RNA病毒核酸的方法,包括步骤:对待提取物使用异硫氰酸胍裂解液裂解;硅胶膜吸附RNA;洗液Ⅰ除去杂蛋白;洗液Ⅱ洗去杂质;DEPC水洗脱核 酸;上述异硫氰酸胍裂解液包括3-7M异硫氰酸胍、0.6%-1.0%TriTon-100、30-50mM Tris-Cl、5-15mM DTT、60-90μg/mL蛋白酶K、10-30mM EDTA,PH在4.3-4.6。

上述洗液Ⅰ包括5-6M盐酸胍,53-59%无水乙醇,K70-90μg/mL蛋白酶,PH在6.4-6.6;上述洗液Ⅱ包括70-80%乙醇。

进一步地,上述异硫氰酸胍裂解液包括5M异硫氰酸胍、0.8%TriTon-100、40mM Tris-Cl、10mM DTT、80μg/mL蛋白酶K、20mM EDTA,pH在4.5。进一步地,上述洗液Ⅰ包括5.5M盐酸胍,56%无水乙醇,80μg/mL蛋白酶K,PH在6.5。进一步地,上述洗液Ⅱ包括75%乙醇。

上述操作步骤包括:

(1)取一干净离心管,100μL样品加入200μL的异硫氰酸胍裂解液中,振荡混匀,放置5分钟。

(2)加入与异硫氰酸胍裂解液等体积的无水乙醇,即200μL,颠倒反复混匀15秒。

(3)将过滤柱套在2mL收集管上,全部混合液移到过滤柱上,12,000rpm离心1分钟。

(4)弃收集管内的液体,往过滤柱加入600μL的洗液1,12000rpm离心1分钟。

(5)弃收集管内的液体,往过滤柱加入600μL的洗液2,12000rpm离心1分钟,再重复一次。

(7)弃收集管内的液体,过滤柱套在收集管上,12000rpm离心1分钟;

(8)换新的1.5mL离心管套上过滤柱,加20μLDEPC到过滤柱膜上,室温放置1分钟,12,000rpm离心1分钟,收集滤液,保存。 

异硫氰酸胍法优势:具有方法简便、快速、成本低的特点。该方法为建立动物RNA病毒和DNA病毒多重PCR方法奠定核酸提取基础。


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